Bibliotheks-Bau GDSBio NGS schnelle DNA-Bibliothek plus Vorbereitungs-Ausrüstung für MGI
Produktdetails:
Herkunftsort: | China |
Markenname: | GDSBio |
Zertifizierung: | ISO9001, ISO13485 |
Modellnummer: | KM004-A, KM004-B |
Zahlung und Versand AGB:
Min Bestellmenge: | 1 Kasten |
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Verpackung Informationen: | Päckchen oder Masse verteilen sich oder Soem |
Lieferzeit: | 8 Arbeitstage |
Zahlungsbedingungen: | L/C, D/A, D/P, T/T, Western Union, MoneyGram |
Versorgungsmaterial-Fähigkeit: | 10000 Kasten/Kästen pro Tag |
Detailinformationen |
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Auf Lager: | ja | Katze. Nein.: | KM004-A, KM004-B |
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Spezifikation: | Rxns KM004-A/24; Rxns KM004-B/96 | Auftritt: | klare Flüssigkeit |
Logo Printing: | Mit Logo Printing | Transportverpackung: | Verpackung |
Haltbarkeitsdauer: | 12 Monate | Lagerbedingungen: | Speicher bei Zimmertemperatur (15-25°C) und bei Zimmertemperatur transportieren. |
Markieren: | RNS Virennukleinsäure-Extraktions-Ausrüstung,DNA Virennukleinsäure-Extraktions-Ausrüstung,Putzlappen-RNS-Extraktionsausrüstung |
Produkt-Beschreibung
Schnelle DNA-Bibliothek plus Vorbereitungs-Ausrüstung für MGI
[Produkt-Name]
Schnelle DNA-Bibliothek plus Vorbereitungs-Ausrüstung für MGI
[Katze. Nein/spezielles]
Rxns KM004-A/24; Rxns KM004-B/96; Beispielsack 6 rxns
[Produkt-Beschreibung]
MGI-hochdurchsatz anstrebend, der Plattform der Reihe nach ordnet, liefert diese Ausrüstung ein bequemes und Universal-DNA-BibliotheksBauvorhaben in einem Rohr. Sie kombiniert Fragmentierung, Endenreparatur und Ein-Rückstand in einen Schritt, groß verkürzt die Zeit des Bibliotheksbaus und verringert den Fehler, der durch langwierige Schritte verursacht wird. Nach Fragmentierung und Endenvorbereitung kann das Produkt mit Adapter ohne zusätzliche Reinigung direkt verbunden werden, und das folgende Verfahren ist das selbe wie das der schnellen Bibliotheks-Vorbereitungs-Ausrüstung DNA-#KM001 für MGI. Nach der Verdünnung der Bibliothek zu einer passenden Konzentration komplette Bibliotheksquantifikation kann durch dsDNA Methode Leuchtstofffärbung (z.B., Thermo Qubit Flex Fluorometer) oder absoluten Quantifikation PCR durchgeführt werden.
[Beispielart]
Empfohlener Input der Tabelle-1 für allgemeine DNA
Anwendung | Beispielart | Empfohlene Menge |
Ganzes Genomder reihe nach ordnen | Komplexe Genome der hohen Qualität | 50ng-1μg |
Zielgefangennahmender reihe nach ordnen des ganzen exome | Komplexe Genome der hohen Qualität | 10ng-1μg |
Zielgefangennahmender reihe nach ordnen des ganzen Genoms | FFPE-DNA | ≥50ng |
Ganzes Genomder reihe nach ordnen | Mikrobengenom | 1ng-1μg |
[Lagerbedingung u. Haltbarkeitsdauer]
Alle Reagenzien sollten am -20°C. Bindungs-Puffer gespeichert werden ist normal, damit Kristalle bei niedrigen Temperaturen, es sollten zur Raumtemperatur vor Gebrauch balanciert werden herbeiführen. Das Produkt ist für 12 Monate gültig.
[Komponenten]
Komponente | 24 rxns | 96 rxns |
FEP-Puffer | μl 120 | μl 480 |
FEP-Enzym-Mischung | μl 240 | μl 2×480 |
Schneller DNA-Ligase | μl 120 | μl 2×240 |
Schneller Bindungs-Puffer | μl 600 | μl 4×600 |
HIFIbibliothek 2× PCR-Vorlagenmischung | μl 600 | μl 4×600 |
Zündkapsel-Mischung für MGI * | μl 120 | μl 480 |
Neutralisations-Puffer | μl 120 | μl 480 |
*FEP-Puffer ist der Fragmentierungs- und Endenvorbereitungsreaktionspuffer. FEP-Enzym-Mischung ist eine Mischung des Enzyms bezogen auf Fragmentierung und Endenvorbereitung.
* wenn es mehr als eine Probe gibt, wird Zündkapselmischung des Adapters #KM002 und #KM003 empfohlen. Diese Ausrüstung liefert einen Satz Zündkapseln, die Zündkapselreihenfolge ist, wie folgt:
5' - TGTGAGCCAAGGAGTTG-3
5' - GAACGACATGGCTACGA-3
Anmerkung: empfohlene Auswahlperlen: Perlen #NC1011 GDSPure DNA Auswahl Magbeads oder AMPure XP.
[Anmerkungen]
1. Wir bieten zwei Arten Universaladapterzündkapseln an, die eingestellt werden (GDS-Adapter, #KM002 und #KM003, separat gekauft), aber Kunden können von anderen Herstellern auch wählen oder ihren eigenen Adapter für das MGI synthetisieren, das Plattform der Reihe nach ordnet. Zu viel Adapter führt zu die Bildung des Adapterdimers, und unzulänglicher Adapter führt zu niedrigen Bibliotheksertrag. Deshalb bestimmt passende Adapterkonzentration die Konzentration und die Qualität der Bibliothek. Die empfohlenen Adapterkonzentrationen für verschiedene Mengen DNA-Input werden in der folgenden Tabelle gezeigt:
Empfohlene Gebrauchs-Konzentrationen der Tabelle-2 des Adapters
DNA gab ein | Empfohlenes Konz. für Adapter | Adapter: Einsatz-Molverhältnis | GDS-Adapter-Verdünnung Degrees* |
1μg | 10μM | 10:1 | Keine Verdünnung |
500ng | 10μM | 20:1 | Keine Verdünnung |
250ng | 10μM | 40:1 | Keine Verdünnung |
100ng | 7.5μM | 100:1 | 3:4 |
50ng | 5μM | 200:1 | 1:2 |
25ng | 2.5μM | 200:1 | 1:4 |
1ng | 1μM | 200:1 | 1:10 |
* ausgedrückt als das Volumenverhältnis des Adapters zum Verdünnungsmittel
2. Das Enzym, das in HIFIbibliothek 2× PCR-Vorlagenmischung benutzt wird, ist eine b-Familie DNA-Polymerase, die 5" - 3" Polymerase und 3" - 5" exonuclease Tätigkeiten hat, aber ermangelt 5" - 3" exonuclease Tätigkeiten. Es hat hohe Wiedergabetreue und Homogenität und starke stützbare Synthesefähigkeit. Strenge Steuerung der Anzahl von Verstärkungszyklen ist für Bibliotheksertrag besonders wichtig. Die folgende Tabelle zeigt die empfohlene Anzahl von Verstärkungszyklen entsprechend verschiedenen Mengen DNA-Input:
Empfohlene Zahl der Tabelle-3 von Verstärkungs-Zyklen entsprechend unterschiedlichem Beispielinput
Eingegebene DNA | Empfohlene Zahl von Verstärkungs-Zyklen | |
Bibliothek 100ng | Bibliothek 1μg | |
1μg | 0 | 2-5 |
500ng | 0 | 2-5 |
250ng | 1-3 | 5-7 |
100ng | 2-4 | 6-8 |
50ng | 4-6 | 8-10 |
25ng | 5-7 | 9-12 |
10ng | 7-9 | 11-13 |
5ng | 9-11 | 13-14 |
2.5ng | 10-12 | 14-16 |
1ng | 11-13 | 15-17 |
Anmerkung: 1. Die oben genannte Tabelle zeigt die Testergebnisse mit 150bp Standard-DNA, die als nur Referenz ist.
2. Wenn unvollständige Verbindungsstücke benutzt werden, sollte eine Mindestzahl von Zyklen (1-3) verstärkt werden, um eine komplette Bibliothek zu erreichen.
3. Wenn die Qualität der Input DNA schlecht ist oder die Größenauswahl während des Bibliotheksbaus durchgeführt wird, sollte die Anzahl von Verstärkungszyklen passend erhöht werden.
[Standardbibliotheks-Bauprozess]
Fragmentierungs-und Enden-Reparatur
1. Bestimmen Sie die lösliche Zusammensetzung von Schablone DNA, wenn kein EDTA, fahren Sie direkt fort, zu treten 2; Wenn EDTA enthalten wird, sollten magnetische Perlen 2.2× für Reinigung benutzt werden, oder ein entsprechendes Volumen des Neutralisations-Puffers sollte entsprechend dem Inhalt von EDTA in der folgenden Tabelle für Neutralisation hinzugefügt werden:
EDTA Konz. | Volumen des Neutralisations-Puffers |
1mM | μl 5 |
0.8mM | μl 4 |
0.6mM | μl 3 |
0.5mM | μl 2,5 |
0.4mM | μl 2 |
0.2mM | 1 μl |
0.1mM | 0,5 μl |
<0> | 0 μl |
2. Bereiten Sie die folgende Reaktion in einem 200 μl PCR-Rohr vor:
Reagenzien | Volumen |
Eingegebene DNA | Μl x |
FEP-Puffer | μl 5 |
Neutralisations-Puffer | Y-μl |
ddH2 O | Zu μl 65 |
3. Fügen Sie 10 μl FEP Enzym-Mischung dem oben genannten System, dem Schlag gleichmäßig, der Zentrifuge kurz hinzu, und sofort gesetzt in PCR-Instrument für die folgende Reaktion:
Temperatur | Zeit |
20°C | 15min |
37°C | Siehe Tabelle 4 |
65°C | 15min |
4°C | ∞ |
Haltezeit der Tabelle-4 erfordert, um Bibliotheken von verschiedenen Größen zu erreichen
Fragment-Größe | Zeit |
150bp | 20-30min |
250bp | 15-20min |
350bp | 10-15min |
550bp | 6-10min |
Adapter-Bindung
1. Fahren Sie mit der Bindungsreaktion so bald wie möglich nach Fragmentierung und Endenvorbereitung fort.
2. Verdünnen Sie den Adapter entsprechend Tabelle 2.
3. Bereiten Sie das folgende Reaktionssystem vor:
Reagenzien | Volumen |
über Produkten | μl 50 |
Schneller Bindungs-Puffer | μl 25 |
Schneller DNA-Ligase | μl 5 |
Adapter X für MGI | μl 5 |
ddH2 O | μl 15 |
Summe | μl 100 |
4. Turbulenz leicht und Drehbeschleunigung unten kurz, zum gut zu mischen, kurz zu zentrifugieren und der ganzer Flüssigkeit zur Unterseite des Rohrs zu sammeln.
5. Führen Sie die folgende Reaktion in einem thermischen cycler durch:
Temperatur | Zeit |
20°C | 15min |
4°C | ∞ |
Empfohlene Lösung für PCR-Reinigung/Größen-Auswahl (das spezifische magnetische Perlenvolumen sollte entsprechend der tatsächlichen Mustergröße justiert werden)
1. Bereiten Sie 100 μl Bindungsprodukte in ein passendes Zentrifugenrohr vor.
2. Fügen Sie μl 100 von erneut ausgesetzten magnetischen Perlen DNA-Auswahl der Probe hinzu. Leicht Schlag mit einer Pipette für 10mal (oder Turbulenz für 30 s). Brüten Sie Proben für Minute 5 bei Zimmertemperatur aus.
3. Setzen Sie das Rohr auf ein passendes magnetisches Gestell, um die Perlen vom schwimmenden zu trennen. Wenn die Lösung klar ist, sorgfältig entfernen Sie und werfen Sie das schwimmende mit einer Pipette weg (werfen Sie nicht Perlen weg).
4. Fügen Sie μl 200 80% frisch zubereiteten Äthanols dem Rohr während im magnetischen Gestell hinzu. Brüten Sie bei Zimmertemperatur für 30 s und das schwimmende dann sorgfältig zu entfernen und wegzuwerfen aus (stören Sie nicht Perlen).
5. Wiederholen Sie Schritt 4 einmal für insgesamt zwei Wäschen.
Anmerkung: Seien Sie sicher, alle sichtbare Flüssigkeit nach dem zweiten Washington zu entfernen.
6. Lufttrocknen Sie die Perlen, bis die Oberfläche der magnetischen Perlen keinen offensichtlichen Glanz hat, während das Rohr auf dem magnetischen Gestell mit dem offenen Deckel ist.
Anmerkung: Tun Sie nicht overdry die Perlen, diese kann niedrigere Wiederaufnahme von DNA ergeben. Wenn die Perlen beginnen zu knacken, sind sie zu trocken.
7. Entfernen Sie das Rohr vom magnetischen Gestell. Fügen Sie 22 μl Eluierungspuffer (10mM Tris-HCl, pH8.0-8.5) dem Rohr hinzu. Mischen Sie gut, indem Sie auf und ab mindestens 10mal pipettieren, oder auf einem Turbulenzmischer für 30 brüten S. für Minute 3-5 bei Zimmertemperatur aus.
8. Setzen Sie das Rohr auf das magnetische Gestell. Nach Minute 5 (oder, wenn die Lösung klar ist), Übergangs-20 μl schwimmend zu einem neuen Rohr. Die Auswahl wird abgeschlossen und die vorgewählte DNA kann für folgende Experimente benutzt werden oder an -20°C für eine lange Zeit gespeichert werden.
Bibliotheks-Verstärkung
1. Bereiten Sie die folgende Reaktion in einem PCR-Rohr vor:
Reagenzien | Volumen |
Bindungsprodukte nach Reinigungs- oder Größenauswahl | μl 20 |
HIFIbibliothek 2× PCR-Vorlagenmischung | μl 25 |
Zündkapselmischung für MGI | μl 5 |
Summe | μl 50 |
2. Turbulenz leicht und Drehbeschleunigung unten kurz, zum gut zu mischen, kurz zu zentrifugieren und der ganzer Flüssigkeit zur Unterseite des Rohrs zu sammeln.
3. Führen Sie die folgende Reaktion in einem thermischen cycler durch:
Temperatur | Zeit | Zyklus-Zahl |
95°C | 3min | 1 |
98°C | 20sec |
Ausgewählte passende Zahl von Zyklen entsprechend Tabelle 3 |
60°C | 15sec | |
72°C | 30sec | |
72°C | 5min | 1 |
4°C | ∞ | - |
Empfohlene Lösung für PCR-Reinigung/Größen-Auswahl (das spezifische magnetische Perlenvolumen sollte entsprechend der tatsächlichen Mustergröße justiert werden)
1. Bereiten Sie 50 μl Bindungsprodukte in ein passendes Zentrifugenrohr vor.
2. Fügen Sie μl 45 von erneut ausgesetzten magnetischen Perlen DNA-Auswahl der Probe hinzu. Leicht Schlag mit einer Pipette für 10mal (oder Turbulenz für 30 s). Brüten Sie Proben für Minute 5 bei Zimmertemperatur aus.
3. Setzen Sie das Rohr auf ein passendes magnetisches Gestell, um die Perlen vom schwimmenden zu trennen. Wenn die Lösung klar ist, sorgfältig entfernen Sie und werfen Sie das schwimmende mit einer Pipette weg (werfen Sie nicht Perlen weg).
4. Fügen Sie μl 200 80% frisch zubereiteten Äthanols dem Rohr während im magnetischen Gestell hinzu. Brüten Sie bei Zimmertemperatur für 30 s und das schwimmende dann sorgfältig zu entfernen und wegzuwerfen aus (stören Sie nicht Perlen).
5. Wiederholen Sie Schritt 4 einmal für insgesamt zwei Wäschen.
Anmerkung: Seien Sie sicher, alle sichtbare Flüssigkeit nach dem zweiten Washington zu entfernen.
6. Lufttrocknen Sie die Perlen, bis die Oberfläche der magnetischen Perlen keinen offensichtlichen Glanz hat, während das Rohr auf dem magnetischen Gestell mit dem offenen Deckel ist.
Anmerkung: Tun Sie nicht overdry die Perlen, diese kann niedrigere Wiederaufnahme von DNA ergeben. Wenn die Perlen beginnen zu knacken, sind sie zu trocken.
7. Entfernen Sie das Rohr vom magnetischen Gestell. Fügen Sie 22 μl Eluierungspuffer (10mM Tris-HCl, pH8.0-8.5) dem Rohr hinzu. Mischen Sie gut, indem Sie auf und ab mindestens 10mal pipettieren, oder auf einem Turbulenzmischer für 30 brüten S. für Minute 3-5 bei Zimmertemperatur aus.
8. Setzen Sie das Rohr auf das magnetische Gestell. Nach Minute 5 (oder, wenn die Lösung klar ist), Übergangs-20 μl schwimmend zu einem neuen Rohr. Die Auswahl wird abgeschlossen und die vorgewählte DNA kann an 2-8°C für 1-2 Wochen gespeichert werden oder an -20°C für eine lange Zeit gespeichert werden.
[Anhang] empfohlener Entwurf für doppelseitige Auswahl
Wenn doppel-runde Auswahl angefordert wird, stellen wir den folgenden Entwurf zur Verfügung, um das passende magnetische Perlenvolumen entsprechend der erwarteten Bibliotheksgröße vorzuwählen. Die Größenauswahl kann vor Endenreparatur oder nach Verstärkung durchgeführt werden. Zwei oder doppel-rundere Auswahl verringert groß den Bibliotheksertrag.
Füllen Sie das Bibliotheksvolumen in der Tabelle unten zu μl 100. Wählen Sie das Volumen von magnetischen Perlen in zwei Runden entsprechend der erwarteten Bibliotheksgröße vor. Und führen Sie die Auswahlarbeit entsprechend den folgenden Anweisungen durch.
Empfohlene Menge der Tabelle-5 magnetische Perlen für Doppel-runde Auswahl
Erwartete Bibliotheks-Größe | 150bp | 200bp | 250bp | 300bp | 400bp | 500bp | 600bp | 700bp | |
Volumen Perlen (μl) | Runde 1 | 100 | 90 | 80 | 70 | 60 | 55 | 50 | 45 |
Runde 2 | 30 | 20 | 20 | 20 | 20 | 15 | 15 | 15 |
1. Füllen Sie das Bibliotheksvolumen zum μl 100 in einem Rohr PCR-200μl und als A. Add ein bestimmtes Volumen magnetische Perlen beschriftet entsprechend der Tabelle 5 (Runde 1) zum Schlag Rohr A. Gently mit einer Pipette für 30 S. brüten Proben für Minute 5 bei Zimmertemperatur aus.
2. Setzen Sie das Rohr A auf ein passendes magnetisches Gestell, um die Perlen vom schwimmenden zu trennen. Wenn die Lösung klar ist, entfernen Sie sorgfältig das schwimmende zu einem neuen Rohr und beschriften Sie es als Perlen B. Discard.
3. Fügen Sie ein bestimmtes Volumen magnetische Perlen entsprechend der Tabelle 5 hinzu (Runde 2) zum Schlag Rohr B. Gently mit einer Pipette für 30 S. brüten Proben für Minute 5 bei Zimmertemperatur aus. Setzen Sie das Rohr B auf magnetisches Gestell. Wenn die Lösung klar ist, das schwimmende sorgfältig entfernen und wegwerfen.
4. Fügen Sie μl 200 80% frisch zubereiteten Äthanols dem Rohr B während im magnetischen Gestell hinzu. Brüten Sie bei Zimmertemperatur für 30 s und das schwimmende dann sorgfältig zu entfernen und wegzuwerfen aus (stören Sie nicht Perlen).
5. Wiederholen Sie Schritt 6 einmal für insgesamt zwei Wäschen.
Anmerkung: Seien Sie sicher, alle sichtbare Flüssigkeit nach dem zweiten Washington zu entfernen.
6. Lufttrocknen Sie die Perlen, bis die Oberfläche der magnetischen Perlen keinen offensichtlichen Glanz hat, während das Rohr B auf dem magnetischen Gestell mit dem offenen Deckel ist.
Anmerkung: Tun Sie nicht overdry die Perlen, diese kann niedrigere Wiederaufnahme von DNA ergeben. Wenn die Perlen beginnen zu knacken, sind sie zu trocken.
7. Entfernen Sie das Rohr B vom magnetischen Gestell. Fügen Sie 22 μl Eluierungspuffer dem Rohr hinzu. Mischen Sie gut, indem Sie auf und ab mindestens 10mal pipettieren, oder auf einem Turbulenzmischer für 30 brüten S. für Minute 3-5 bei Zimmertemperatur aus.
Anmerkung: Wenn gerichtete Gefangennahme nicht durchgeführt wird, fügen Sie Eluierungspuffer (10mM Tris-HCl, pH 8.0-8.5) für Eluierung hinzu. Andernfalls sollte entkeimtes Reinstwasser für Eluierung benutzt werden.
- Platzrohr B auf dem magnetischen Gestell. Übergangs-20 μl schwimmend zu einem neuen Rohr.
Für nur Forschungs-Gebrauch
GDSBio ist ein High-Teches Unternehmen, das auf Forschung und Entwicklung, Produktion und Verkäufe von hochwertigen Biowissenschaftsprodukten sich konzentriert. Die Firma hat eine Fertigwareproduktserie, mit PCR-Technologie als der Kern und konzentriert sich auf allgemeinen PCR, Fluoreszenz quantitativer PCR-, NGS-Speicher, Nukleinsäureelektrophorese und andere Molekularbiologietechnologien, und hat molekulare Forschungsreagenzien, molekulare in-vitrodiagnoserohstoffe, Nukleinsäureextraktions- und Entdeckungsreagenzien und andere Produkte entwickelt.